این فیلم داستان سفر برادران ماریو از میان سرزمین قارچ ها را روایت می کند.

مایلز مورالس ناگهان پرت می‌شود به جهان موازی، جایی که با تیمی از افراد عنکبوتی که وظیفه حفاظت از موجودیت آن را دارند، مواجه می‌شود. هنگامی که قهرمانان در مورد چگونگی مقابله با یک تهدید جدید با یک‌دیگر به مشکل می‌خورند، مایلز باید معنای قهرمان بودن را دوباره تعریف کند.

گربۀ چکمه‌پوش متوجه می شود که اشتاق او به ماجراجویی تاثیرات مخربی داشته اند و او هشت جون از نه جونی که دارد را از دست داده است به همین دلیل راهی سفری می شود تا آخرین آرزوی افسانه ای را پیدا کند و هشت جان از دست رفته اش را دوباره به دست بیاورد